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    嬰幼兒配方食品和乳粉中維生素K1的測定(鋅粉還原柱-HPLC

    方法概要:在嬰幼兒配方食品和乳粉中加入適量的脂酶,酶解后用NaOH 皂化,用正己烷萃取,蒸干后用正己烷溶解,用高效液相色譜柱后衍生法(HPLC-鋅粉還原柱)用熒光檢測器定量測定維生素K1。
    參考方法:采用即將替代GB/T5413.10-1997 的新國標(還沒有正式公布)
    方法步驟:
    1
    、 試劑和耗材:HPLC 級正己烷(CAEQ-4-011518-2500 );無水硫酸鈉(CBEQ-4-103502-1000 );HPLC 級甲醇(CAEQ-4-003302-4000 );HPLC 級冰醋酸(乙酸,CAEQ-4-0112450500);HPLC 級二氯 甲烷(CAEQ-4-012001-4000);維生素K1 標準品(CDCT-C17924400
    2
    、 提。悍Q取約2.5 g(精確到0.1mg)混合均勻的試樣于三角瓶中(含淀粉的試樣加入0.5g 淀粉酶),用 30ml 溫水溶解,加入1g 酯酶,于37恒溫空氣震蕩器中震蕩過夜,使其充分酶解。然后加入2ml 10mol/L 氫氧化鈉溶液,轉移至500ml 的分液漏斗中,加入50ml 乙醇,充分混勻。再加入50ml 正己烷,加塞振搖 2min,靜置分層。放出下層于另一個500ml 分液漏斗中再次加入50ml 正己烷萃取,靜置分層,棄去水相, 合并正己烷。加入適量蒸餾水洗有機相兩次,棄取水相,將正己烷通過無水硫酸鈉過濾到500ml 的平底燒 瓶中,在旋轉蒸發器上40下蒸發至近干,用正己烷轉移殘留物到10ml 指形瓶中,用氮氣吹干,準確加 1ml 正己烷,充分振蕩溶解殘留物,得到待測液,在冰箱中冷凍一小時后備用。
    3
    、 HPLC 測定方法:
    4.1
    色譜柱:Cnwsil C18,150×4.6mm, 5μmLAEQ-1815004605
    4.2
    衍生柱:鋅粉還原柱,35×4.6mmLAAA-0001
    4.3
    流動相:甲醇900ml,二氯甲烷100ml,冰醋酸0.3 ml,氯化鋅1.5g,無水乙酸鈉0.5g,溶解過0.45
    濾膜。
    4.4
    進樣量:10 μL
    4.5
    速:1.0 mL/min
    4.6
    檢測波長:熒光檢測器:波長EX=243nm EM=430nm
    4
    、結果分析:
    4.1
    、分析圖譜
    VK1
    標準溶液色譜圖(熒光檢測器)0.4ug/ml VK1 標準溶液色譜圖(熒光檢測器)0.04ug/ml
    嬰幼兒配方色譜圖(熒光檢測器)
    5.2
    、結果分析
    Cnwsil C18150×4.6mm, 5μm)色譜柱和鋅粉還原柱(35×4.6mm)串聯柱后衍生法分析嬰幼兒配方食品中的維生素K1,分離效果良好,峰形對稱,重復性好。

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