一、樣品信息
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樣品組分 |
結構式 |
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檸檬黃 |
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新紅 |
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莧菜紅 |
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靛藍 |
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胭脂紅 |
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日落黃 |
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誘惑紅 |
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亮藍 |
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參照《食品中合成著色劑的測定》（GB/T5009.35-2003），建立紅酒中的合成著色劑的SPE-HPLC檢測方法。
l 乙酸；
l 甲醇；
l 乙酸銨溶液（0.02mol/L）：稱取1.54g乙酸銨，加水溶解并稀釋至1000mL；
l 氨水溶液：量取氨水2mL，加水至100mL，混勻；
l 甲醇/甲酸（6+4）溶液：量取甲醇60ml，甲酸40mL，混勻；
l 檸檬酸溶液：稱取20g檸檬酸，加水至100mL溶解，混勻；
l 無水乙醇-氨水溶液-水：量取無水乙醇70mL，氨水溶液20mL、水10mL，混勻；
l 水（PH=6.0）：水加檸檬酸溶液調節PH=6.0；
l 水（PH=4.0）：水加檸檬酸溶液調節PH=4.0；
l 水：超純水
l 合成著色劑儲備液：每1.0mL中含檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、亮藍各0.5mg，誘惑紅0.1mg的水溶液；
l 合成著色劑使用液：上述合成著色劑儲備液逐級稀釋成每1.0mL中含檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、亮藍各5μg，誘惑紅1μg的水溶液；
l Cleanert® JXA SPE小柱：規格為1g/6mL，使用前經5mL甲醇和5mL pH=6.0的水活化。
3.2.實驗耗材
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名稱 |
規格 |
訂貨號 |
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Venusil® XBP C18 |
5μm，100A，4.6*150mm |
VX951505-0 |
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保護柱芯 |
4.6*10mm，4/pk |
VX950105-0 |
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保護柱套 |
適用于4.6*10mm的保護柱芯 |
CH-100 |
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Cleanert® JXA |
1g/6mL，30/盒 |
JXA0006 |
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Hydrophilic PTFE |
0.45um，13mm，100/包 |
AS081345 |
取試樣（某品牌紅酒）20mL,加入合成著色劑混標溶液1.0mL，混勻，用10%氨水調節PH約6.0，將全部試樣經過Cleanert® JXA柱，分別用水（PH=4.0）、甲醇/加酸（6+4）溶液6ml淋洗，再用10mL水淋洗，用乙醇-氨水溶液-水（7+2+1）6mL洗脫，收集洗脫液于50℃水浴蒸發至干，加水定容至1.0mL，經0.45μm濾膜過濾，待測。
色譜柱：Venusil® XBP C18，5μm；4.6*150mm；
流動相：A：0.02mol/L的乙酸銨溶液（乙酸調節pH=4）；
B：甲醇
流 速：1.0mL/min；
進樣量：20μL；
波 長：254nm；
梯 度：
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時間 |
A% |
B% |
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0 |
95 |
5 |
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10 |
80 |
20 |
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18 |
40 |
60 |
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25 |
40 |
60 |
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25.01 |
95 |
5 |
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40 |
95 |
5 |
表1.添加5ppm混標峰面積數據
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樣品組分 |
標品 |
標樣過柱1 |
標樣過柱2 |
紅酒樣品1 |
紅酒樣品2 |
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檸檬黃 |
318 |
320 |
315 |
294 |
324 |
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新紅 |
471 |
474 |
461 |
482 |
473 |
|
莧菜紅 |
266 |
269 |
262 |
277 |
279 |
|
靛藍 |
314 |
282 |
279 |
273 |
275 |
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胭脂紅 |
266 |
267 |
263 |
246 |
240 |
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日落黃 |
234 |
238 |
234 |
210 |
212 |
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誘惑紅 |
33 |
33 |
33 |
35 |
34 |
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亮藍 |
39 |
40 |
39 |
37 |
37 |
表2.添加5ppm混標回收率數據
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樣品組分 |
標樣過柱1（%） |
標樣過柱2（%） |
紅酒樣品1（%） |
紅酒樣品2（%） |
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檸檬黃 |
100.6 |
99 |
92.5 |
102 |
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新紅 |
100.6 |
97.8 |
102 |
100 |
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莧菜紅 |
101 |
98.5 |
104 |
105 |
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靛藍 |
89.8 |
88.8 |
86.9 |
87.5 |
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胭脂紅 |
100.3 |
98.8 |
92.5 |
90.2 |
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日落黃 |
101 |
100 |
90 |
90.6 |
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誘惑紅 |
100 |
100 |
106 |
103 |
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亮藍 |
102 |
100 |
95 |
95 |
五、實驗結論
實驗結果表明，Cleanert® JXA小柱和Venusil® XBP C18液相色譜柱可以用于紅酒中的合成著色劑的檢測，該方法快速、準確。
紅酒樣品呈弱酸性，在上樣之前要將其pH值調節至6左右，保證小柱可對合成著色劑有良好地吸附；
若樣品酒精度過高，建議在上樣前對樣品進行除醇處理；
SPE小柱凈化過程中，要注意對流速的控制，建議控制在1mL/min左右；
洗脫液氮吹復溶后，應選用水系濾膜過濾，防止因濾膜吸附造成樣品的損失，建議選用Agela Hydrophilic PTFE濾頭。
附錄：
圖1 5ppm混標溶液
圖2 5ppm混標過柱1
圖3 5ppm混標過柱2
圖4 紅酒空白圖譜
圖5 5ppm基質加標1
圖6 5ppm基質加標2
